外泌體(ti) 製備，便宜又好用的方法

外泌小體(ti) （Exosome）是一種囊泡結構，直徑通常在30-150nm，常見於(yu) 正常體(ti) 液和病理樣本，培養(yang) 細胞也可分泌。研究人員已經在血液、唾液、尿液、母乳等中發現外泌小體(ti) ，其運載的蛋白和核酸涉及其細胞間物資、信息交流，影響和調控著多方麵的生理功能，包括腫瘤發生、免疫促進、凋亡調控、血管生成、炎症反應及發育和分化 等。由於(yu) 在體(ti) 液中出現，外泌小體(ti) 對於(yu) 臨(lin) 床生物標誌物檢測特別有 利，成為(wei) 體(ti) 外診斷、biomarker研究的新熱點。

近年來隨著分離純化技術的提高，關(guan) 於(yu) 外泌小體(ti) 的研究成果頗豐(feng) ；這進一步吸引了越來越多領域的課題將外泌體(ti) 納入研究對象。研究的前提是方便、高效、標準化地分離純化外泌小體(ti) 。經過近20年的探索，已經建立了超速離心法、沉澱法、色譜法、親(qin) 和純化法等。在大量實踐中大家逐漸認識到根據下遊研究對樣品的要求，以及起始樣品的規模、數量，可以選擇不同的外泌體(ti) 製備策略。因不需要特殊的設備和試劑盒，對操作人員也沒有特別的經驗要求，超濾法成為(wei) 實驗室中製備外泌體(ti) 的通用方法。

參考方案

兩(liang) 步法細胞上清的外泌體(ti) 分離

超濾方法純化具體(ti) 操作步驟舉(ju) 例

Amicon® Ultra-15 超濾管 (10 kDa MWCO)

● 用Steriflip真空抽濾對樣品進行澄清[目錄號 SCGPO0525; 0.22um Millipore Express PLUS (PES)膜]

● 用PBS平衡Amicon Ultra-15超濾管( 目錄號UFC901096，10kDa) ，離心 4000g X 10 min。

● 從(cong) 超濾管內(nei) 管及收集管吸走 PBS。

● 向超濾管加入15mL 樣品。

●  4000g 離心30min.濃縮。

●  倒空收集管。

●  加入14 mL PBS進行緩衝(chong) 液置換，溫柔吸打樣品數次。

●  4000g離心30 min。

●  從(cong) 濃縮管吸回處理好的樣品。(30X 濃縮)

注意: 所有 Amicon  ultra 超濾管(0.5,2,4 和15 mL)與(yu) 此操作流程兼容*

注意事項及補充提示

● 無血清樣品選擇 3kDa 孔徑是為(wei) 了盡可能提高外泌體(ti) 的回收率。

● 有血清樣品選擇 100kDa/500kDa 孔徑是為(wei) 了盡可能去除細胞分泌蛋白以及血清成分中小於(yu) 外泌體(ti) 的白蛋白造成的影響。

● 研究者可根據樣品的粘稠程度，以及需要製備的目標外泌體(ti) / 囊泡 / 顆粒的大小分布來選擇和優(you) 化超濾孔徑(3kDa/ 10kDa/ 30kDa/ 50kDa/ 100kDa)，以便達到更好的得率和操作體(ti) 驗。

● 樣品體(ti) 積大於(yu) 30mL 時可以考慮用超濾杯或 Centricon plus -70 超管，請注意攪拌式超濾杯在 200mL 以內(nei) 時吸附損

耗可能較離心式超濾管略偏高。

● 如需進一步提高特定外泌體(ti) 的純度，可選用包被相應抗體(ti) 的磁珠進行親(qin) 和純化精製。

不同方法製備外泌小體(ti) 產(chan) 量比較

超濾法製備的外泌小體(ti) 參考數據

多維度分析4 個(ge) SH-SY-5Y 細胞係的外泌小體(ti) 樣品

(含或不含血清)

默克生命科學過濾超濾產(chan) 品組合